巴氏染色液如何快速染色？

更新時(shí)間：2019-09-17瀏覽：5382次

巴氏染色液的巴氏染色法是病理切片和脫落細(xì)胞染色中較好的較常用的染色方法，該染色法不但具有顯示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，分色明顯，透明度好，胞漿受色鮮艷等特點(diǎn)，而且所染標(biāo)本不易脫色，可長(zhǎng)久保存。細(xì)胞核的主要成分是脫氧核糖核酸，其等電點(diǎn)為pH 1.6-2.0，當(dāng)pH大于2.0時(shí)DNA帶負(fù)電，能與帶正電的染料陽(yáng)離子結(jié)合。蘇木素是染核的染料，氧化后成為氧化蘇木素即蘇木素紅或蘇木精，它的等離子點(diǎn)是PH 6.5，當(dāng)染液的酸堿度調(diào)節(jié)到PH 2.2-2.9時(shí)，蘇木精能析出陽(yáng)離子，與帶負(fù)電的DNA結(jié)合。因?yàn)樘K木精陽(yáng)離子電荷不強(qiáng)，與DNA結(jié)合不牢，所以染色不深。當(dāng)加入鉀礬等媒劑后，即結(jié)合成帶強(qiáng)正電的大分子帶色體——蘇木精礬，后者具有強(qiáng)大親和力，與DNA結(jié)合牢固，染成較深紫色，不易為醇、水洗脫。細(xì)胞漿中的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)約為PH 6.0，在不同的酸堿度中能與不同的染料結(jié)合。但在PH小于4時(shí)便不能再與染料的陽(yáng)離子結(jié)合；PH大于8時(shí)便不再與染料的陰離子結(jié)合。伊紅、亮綠、桔黃、俾士麥棕的發(fā)色部分都是陰離子，只能與蛋白質(zhì)的陽(yáng)離子結(jié)合，因此染色環(huán)境不能太酸太堿。較年輕的細(xì)胞如底層鱗狀上皮細(xì)胞漿中核蛋白體較多，易與亮綠結(jié)合而染綠色。成熟的細(xì)胞漿中含核蛋白體較少(如成熟紅細(xì)胞、表層角化鱗狀上皮細(xì)胞)易與伊紅結(jié)合而染紅色。很衰老的細(xì)胞(如*角化細(xì)胞)則可與桔黃結(jié)合而呈桔黃色。

　　巴氏染色液快速染色的具體實(shí)施方式：

　　本實(shí)施例巴氏染色液是由細(xì)胞核染色液和細(xì)胞漿染色液構(gòu)成；

　　1.細(xì)胞核染色液的配制：

　　2.將0.3g蘇木素色精單獨(dú)溶解于30ml無(wú)水乙醇中得蘇木素酒精液；將硫酸鋁銨6g置于1000ml大燒杯中加蒸餾水700ml，加熱至70-80℃，攪拌使其*溶解，然后加溫至

　　90℃，關(guān)斷熱源即加入蘇木素酒精液，邊加邊攪拌，加完之后繼續(xù)加熱至沸即離開(kāi)熱源；再向其中加入0.5g黃色HgO粉末，邊加邊攪拌，繼續(xù)加熱使溶液經(jīng)目測(cè)呈深紫色，立即置于10-30℃的水中進(jìn)行水浴冷卻；冷卻到10-30℃后置于塑料桶中，加入體積百分比為1％冰乙酸2ml，經(jīng)濾紙濾去殘?jiān)吹眉?xì)胞核染色液，避光保存；冰乙酸的加入能穩(wěn)定蘇木素染色團(tuán)抗拒氧化，使不過(guò)染，也減少沉淀形成；

　　3.細(xì)胞漿染色液的配制：

　　4.取0.1g橙黃G6溶于100ml、體積百分比為95％的酒精得橙黃G6酒精液為備用料；

　　5.取0.1g亮綠溶于100ml、體積百分比為95％的酒精得亮綠酒精液為備用料；

　　6.取0.05g俾仕麥棕溶于100ml、體積百分比為95％的酒精得俾仕麥棕酒精液為備用料；

　　7.取0.1g伊紅溶于100ml、體積百分比為95％的酒精得伊紅酒精液為備用料；

　　8.取磷鎢酸0.5g為備用料；

　　9.所有備用料充分混勻溶解后即為細(xì)胞漿染色液。

　　10.利用以上過(guò)程制備的巴氏染色液的快速染色方法是在22℃的室溫環(huán)境下按如下步驟進(jìn)行操作：

　　a、固定：將未干的宮頸分泌物涂片置體積百分比為95％的酒精中，15-30分鐘時(shí)取出得固定涂片；

　　b、染核：將步驟a所得固定涂片置于細(xì)胞核染色液中染色2分鐘，取出后用蒸餾水沖凈得染核涂片，立即進(jìn)行下一步驟的染漿；

　　c、染漿：將染核涂片置于細(xì)胞漿染色液中，2分鐘取出，先后在兩缸體積百分比為95％的酒精液中洗滌至無(wú)細(xì)胞漿染色液附著即得染漿涂片，染漿涂片即可用于進(jìn)行鏡檢；

　　若需要長(zhǎng)期保存則繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)步驟d的封片；