鹽酸酒精分化的作用為分化掉胞漿上沾上的蘇木素，因此時間不宜長，但如果分化不夠，會造成細胞核顏色過深或（及）胞漿很難上色；分化后立即用自來水沖洗，不宜久置，否則可使全部顏色消失。返藍亦稱堿化，返藍時間偏短則著色不充分，影響染色效果，碳酸鋰每缸過500張玻片更新。

 

  操作巴氏染色液技術人員要流暢，動作干凈利落，不可把上一缸染色液帶入下一缸，每缸交替時要甩干玻片上殘存液體。細胞漿著色不佳應考慮的因素，如果全片內胞漿都淡染，則需延長染色時間或更換新液。如果胞漿不分色或均為淺紅色，適當增加染色時間能夠部分糾正不分色狀況。胞漿染成灰色或紫色是由于蘇木素染色時間過長或鹽酸酒精分化不佳，經過褪色后重新蘇木素染色可以糾正。由于標本的不同，同樣配方的EA染液可造成偏藍、偏綠和偏紅，對不同的標本應使用不同的EA染液，一般認為：EA36和EA50較適用于婦科標本，而EA65或改良EA較適用于非婦科標本。

  

  巴氏染色液詳細介紹，將涂片置于95%乙醇中固定15 分鐘以上，依次浸入80%、50%乙醇中各30 秒，水洗1～2分鐘，甩干，浸入蘇木精染液中3～5分鐘，水洗1～2分鐘，甩干，浸入鹽酸酒精分化液中分化數秒，水洗1～2分鐘，甩干。浸入返藍液中數秒，水洗1～2 分鐘，甩干。置于95%乙醇中漂洗，水洗甩干。浸入橘黃G染液中染1～3分鐘；95％乙醇、95％乙醇、無水乙醇中漂洗各1次，時間各10～20秒。浸入EA36染液（或EA50染液）中染色2～5分鐘，95％乙醇、95％乙醇、無水乙醇中漂洗各1次，時間各10～20秒。浸入浸蠟脫蠟透明液中2分鐘。中性樹膠封固，鏡檢。