HE染色
HE染色介紹
　蘇木精 — 伊紅染色法 （ hematoxylin-eosin staining ） ，簡(jiǎn)稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中zui基本、使用zui廣泛的技術(shù)方法。
HE染色分類(lèi)
易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性（ basophilia ）和嗜酸性（ acidophilia ）；而對(duì)堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性（neutrophilia）。 　　組織內(nèi)的蛋白質(zhì)構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸的種類(lèi)很多，它們有不同的等電點(diǎn)。在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜堿性。而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度，pH值升高時(shí)，則原來(lái)被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性；pH值降低時(shí)，原來(lái)被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝?。所以說(shuō)染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。 　　脫氧核糖核酸（DNA）兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中稱藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合使胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比。伊紅是細(xì)胞漿的良好染料。 　　由于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后，細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈藍(lán)色，可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍(lán)，如處理適宜，可使細(xì)胞核著清楚的深藍(lán)色，胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿，使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細(xì)胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)均可顯示出來(lái)。
HE染色結(jié)果
細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色，粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。 　　著色情況與組織或細(xì)胞的種類(lèi)有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，很多細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí)，伊紅著色由淺變深。
常規(guī)HE染色步驟
試劑配置
　　A：0.5~1% 的伊紅酒精溶液： 　　稱取伊紅Y 0.5~1 g，加少量蒸餾水溶解后，再滴加冰醋酸直至漿糊狀。以濾紙過(guò)濾，將濾渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工業(yè)酒精，如果不怕浪費(fèi)，用無(wú)水乙醇配制也可）100毫升溶解。 　　B：蘇木素染液配方：（配制3000 ml，可按比列減少） 　　蘇木精 6 g 　　無(wú)水乙醇 100 ml 　　硫酸鋁鉀 150 g 　　蒸餾水 2000 ml 　　碘酸鈉 1.2 g 　　冰醋酸 120 ml 　　甘油 900 ml 　　配制方法：將蘇木素溶于無(wú)水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水，溶解后將甘油傾入一起混合，zui后加入冰醋酸和碘酸鈉。 　　C：1%鹽酸酒精分化液：將1毫升濃鹽酸加入99毫升70%酒精中即可。
染色流程
　?。?）二甲苯（Ⅰ） 15min 　?。?） 二甲苯（Ⅱ） 15 min 　?。?）二甲苯：無(wú)水乙醇=1:1 2min 　　（4）100%乙醇（Ⅰ） 5min 　?。?）100%乙醇（Ⅱ） 5 min 　?。?）80%乙醇 5min 　?。?）蒸餾水 5 min 　?。?）蘇木精液染色 5 min 　?。?） 流水稍洗去蘇木精液 1-3 s 　?。?0） 1%鹽酸乙醇 1-3 s 　?。?1） 稍水洗 10-30 s 　?。?2）蒸餾水過(guò)洗 1-2 s 　?。?3） 0.5%伊紅液染色 1-3 min 　?。?4） 蒸餾水稍洗 1-2 s 　　（15） 80%乙醇稍洗 1-2 s 　?。?6） 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s 　?。?7） 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 s 　?。?8） 無(wú)水乙醇 5-10 min 　?。?9） 石炭酸二甲苯 5-10 min 　?。?0） 二甲苯（Ⅰ） 2 min 　　（21） 二甲苯（Ⅱ） 2 min 　?。?2） 二甲苯（Ⅲ） 2 min 　　（23） 中性樹(shù)膠封固 　　注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步?jīng)_水時(shí)間需延長(zhǎng)至20-30min。 　　②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用無(wú)水乙醇。 　　* 冷凍切片HE染色步驟： 　?。?）冰凍切片固定 10～30 s 　?。?）稍水洗 1～2 s 　?。?）蘇木精液染色（60℃） 30～60 s 　?。?）流水洗去蘇木精液 5～10 s 　　（5）1%鹽酸乙醇 1～3 s 　?。?）稍水洗 1～2 s 　?。?）促藍(lán)液返藍(lán) 5～10 s 　?。?）流水沖洗 15～30 s 　?。?）0.5%曙紅液染色 30～60 s 　?。?0）蒸餾水稍洗 1～2 s 　　（11）80%乙醇 1～2 s 　?。?2）95%乙醇 1～2 s 　　（13）無(wú)水乙醇 1～2 s 　?。?4）石炭酸二甲苯 2～3 s 　?。?5）二甲苯（Ⅰ） 2～3 s 　　（16）二甲苯（Ⅱ） 2～3 s 　?。?7）中性樹(shù)膠封固。 　　注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用無(wú)水乙醇。 　　染色結(jié)果：細(xì)胞核藍(lán)色，胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維和紅細(xì)胞呈深淺不一的紅色。 　　4．12 切片脫水透明 切片經(jīng)HE染色后，要*脫水透明，才能用中性樹(shù)膠封蓋。如果脫水不*，封片后呈白色霧狀，鏡下觀察模糊不清，且容易褪色。切片1-2級(jí)無(wú)水乙醇脫水，也可使用石碳酸二甲苯進(jìn)行脫水。石碳酸有較強(qiáng)脫水能力，但長(zhǎng)時(shí)間可使切片脫色，因此要經(jīng)過(guò)多次二甲苯以使石碳酸*除去。